血清血漿TaqMan miRNA反轉錄試劑盒采用加A法進行反轉錄，加A法的反轉錄效率遠高于莖環(huán)法，因此，采用該方法可極大

的提高檢測靈敏度（原理見圖1）。該試劑盒操作簡單，僅需要兩步即可輕松完成miRNA的cDNA合成，合成的cDNA可用于

所有miRNA的后續(xù)定量檢測。miRNA反轉錄完畢后采用特異性的上游引物和接頭引物進行PCR擴增，F(xiàn)AM標記TaqMan探針

作為熒光報告基團進行定量檢測（原理見圖1）。

專用于血清血漿miRNAs分子的反轉錄試驗（不可用于組織和細胞），

轉錄獲得的cDNA產(chǎn)物用于TaqMan定量PCR方法檢測miRNAs分子

組分

組分名稱數(shù)量(25T/100T）

5×TaqMan miRNA RT Solution A65μl/250μl

10×TaqMan miRNA RT Solution B65μl/250μl

10×PS TaqMan miRNA RT Primer65μl/250μl

RNase Free H2O1ml/1mlx2

儲存

請置于-20°C，可保存2年；避免反復凍融。

血清血漿TaqMan miRNA反轉錄試劑盒恒溫擴增使用策略及實例展示

應用實例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果，可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。

應用實例2： 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略，在反應結束后，倒置反應管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。

應用實例3：A3825-01 紅黃變色反應（肉眼觀察）

以 體外轉錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起

始前，下圖為 65 度反應 30min 后。

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