A-498（ATCCHTB-44）源于52歲女性腎透明細胞癌患者，由AaronsonS建立，屬上皮樣貼壁細胞，倍增時間約33至60小時。以下為標準化操作規(guī)范。
培養(yǎng)體系。培養(yǎng)基采用MEM（含NEAA）或DMEM，加10%優(yōu)級胎牛血清及1%青霉素-鏈霉素雙抗。培養(yǎng)環(huán)境嚴格控制在37℃、5%CO?、飽和濕度條件下。密集培養(yǎng)時胞內可見巨大空泡，屬正常特性，無需干預。
傳代操作。細胞密度達80%至90%時啟動傳代，推薦比例1:2至1:4，傳代建議1:2。棄舊液后以不含鈣鎂的PBS潤洗一至兩次，加0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液1毫升，37℃消化1至2分鐘，鏡下見細胞變圓、間隙增大即終止，輕拍瓶壁后加含血清培養(yǎng)基中止消化。1000RPM離心4分鐘，棄上清，新鮮培養(yǎng)基重懸后均勻分瓶，補足培養(yǎng)基后靜置培養(yǎng)。消化時間需嚴格把控，過度消化將直接損傷細胞活性。
換液與凍存。每周換液2至3次。凍存采用梯度降溫法：凍存液配方為90%培養(yǎng)基加10%DMSO，或55%基礎培養(yǎng)基加40%FBS加5%DMSO，細胞濃度不低于1×10?/mL。經程序降溫盒-80℃過夜后轉入液氮長期保存，轉入后務必復蘇一管驗證活性。
污染防控。支原體、細菌、真菌檢測均為陰性方可使用。全程嚴格無菌操作，定期檢測支原體，必要時以雙抗預防細菌污染。
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